支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2μm)并独立生活的微生物，没有细胞壁，表面由胞质膜构成，约有1%的支原体可通过滤菌器。支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊，多数情况下细胞病理变化轻微或不显著。细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。支原体污染细胞后会影响下游试验结果。

    德国Applichem 所提供Myco 系列支原体清除产品可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效地清除支原体污染，而且没有细胞毒性。另有支原体检测与预防试剂盒可以给细胞提供更多的安全保护。

Myco-3（A5240）使用方法

Myco-3主要成分为氟喹酮类的环丙沙星，100倍浓缩液直接加入培养基中，每2~3天换液一次，连续处理14天，可清除大多数支原体污染。用Myco-3无法清除的顽固支原体或停用后又出现支原体污染的情况建议使用Myco-1和Myco-2来处理。注：Myco-3停用2周后方可进行支原体检测。

相关产品：

1. 顽固性支原体清除产品：

Myco-1（A5222）与Myco-2（A5233）

Myco-1 的主要成分为泰妙菌素，Myco-2 的主要成分为二甲胺四环素（四环素衍生物）。Myco-1 与Myco-2 均为100 倍浓缩液，直接加入培养基中。两者配合使用：用Myco-1 处理4 天后换Myco-2处理3 天，如此重复2~3 次即可。Myco-1 与Myco-2 不影响支原体检测，因此细胞在用这2 种抗生素处理的过程中可直接进行支原体检测。

Myco-4（A8366） NEW!

专利配方，细胞毒性极低，可彻底清除细胞（包括贴壁细胞和悬浮细胞）及病毒培养物中的支原体污染。产品由1瓶起始处理液和3 瓶维持液组成。

使用方法

1. 取4.5ml 细胞培养基（含5%FCS）加入到无菌培养瓶或培养皿中，再加入500ul Myco-4 起始处理液混匀。

2. 向培养瓶中加入5ml 待处理细胞（约104~105 单个细胞，含5% FCS） 注：需确保细胞被完全分散成单个细胞；而且加入细胞时需将滴头直接浸入5ml 混合液中，以避免支原体逸散到空气中。

3. 正常培养至80%~90%培养瓶后进行正常传代，每9.5ml 传代细胞中加入500ul 的Myco-4 维持液。

4. 2 次重复第三步，即用Myco-4 维持液连续处理3 次可完全清除全部支原体。

注意事项：

1. 一次处理细胞不要超过105 单个细胞；

2. 高浓度的FCS 中的蛋白质与脂类物质会影响Myco-4 与支原体质膜结合，因此在处理过程中要求使用5%FCS 浓度；

3. 病毒中的支原体需要与其宿主细胞一起处理；

4. Myco-4 是与支原体直接接触后发挥作用的，而不规则细胞形态和细胞团块都将影响Myco-4 与支原体的直接接触，因此在使用该产品建议用胰酶将细胞处理成表面光滑的单个细胞。

2. 支原体预防系列

Incubator-Clean（A5230）——CO2 培养箱消毒剂

Incubator-Clean 的活性成分为四苯甲基化合物，用于正在进行细胞培养的CO2 培养箱的消毒，可以有效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒（包括HIV、HBV）等污染！另外Incubator-Clean 还可用于无菌工作台的消毒！每次实验操作前用本品对台面进行喷雾处理。

使用方法：喷头对准CO2 培养箱的内壁进行喷雾使内壁完全湿润即可，使用时无须移出正在培养的细胞。建议培养箱每2 周用Incubator-Clean 处理一次。

Incuwater-Clean（A5219）——CO2 培养箱水源消毒剂

Incuwater-Clean 是一种用于CO2 培养箱内保持空气湿度的水源消毒剂，不会对金属水盘造成腐蚀。100 倍浓缩直接加入灭菌水中，使用方便。建议培养箱中每2~4 周更换一次灭菌水，加入Incuwater-Clean。

Aquabator-Clean（A9390）——水浴锅消毒剂

Aquabator-Clean 用于预防各种水浴锅中真菌、细菌污染。使用时每升水中加入2ml Aquabator-Clean，建议每1~2 周向水浴锅中加一次该试剂，每4~6 周给水浴锅换一次水。

3. 支原体污染检测系列

AppliChem 的3 种支原体检测试剂盒均根据支原体16S rRNA 保守序列设计引物，经由PCR 反应扩增其16S rRNA 片段，可用于检测绝大多数支原体，如M. arginini, M. arthritidis, M. bovis, M. capricolum,M. fermentans, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. pneumonia, M.pulmonis, M,salivarium 等，灵敏度达100~1000CFU/ml。

PCR Mycoplasma Test Kit（A3744）

试剂盒组份

Reaction Mix

Buffer Solution

Positive Template Control

qPCR Mycoplasma Test Kit（A9019）

适用仪器：LightCycler®1.2, 1.5, 480, Rotor-GeneTM3000, 6000, ABI Prism®7000, iCycler iQ®, iQTM5, Opticon 2,Chromo 4, MX300P®, MX4000®。

试剂盒组份

Primer/Probe/Nucleotide Mix

Rehydration Buffer

Positive Control DNA

Internal Control DNA

PCR Grade Water

* Taq DNA polymerase 需要自备，建议使用SuperHot Taq DNA polymerase。